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产品简介
购买须知
| 产品名称 | 枯草芽孢杆菌SpoA整合位点 表达外源蛋白，产量高 |
| 商品货号 | TSPLA11086 |
| 商品信息 | 枯草芽孢杆菌整合位点对外源蛋白的表达具有重要作用。常用整合位点： amyE , lacA 位点, 一些氨基酸营养 位点如 thrC 位点, 还包括一些功能蛋白位点, 如 ropC 位点。 有研究证明整合在 amyE 位点时表 达量最高, 而在 thrC 位点活性很低, 在 SPb 位点时 几乎检测不到b-半乳糖苷酶的活性 spo0A 基因是控制枯草杆菌芽孢生成的基因 之一, 在枯草杆菌稳定期起始时开始表达, 其表达产 物不仅调节着其它芽孢生成相关基因的表达, 而且 影响着枯草杆菌稳定期其他相关代谢产物基因的表 达。 在枯草杆菌的 spo0A- 突变株中, 其内源蛋白酶的表达量较野生株低 [ 9, 10] , 这可在一定 程度缓解宿主蛋白酶对外源基因目的蛋白的降解。 |
| 使用说明 | 质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必先转化提质粒后使用）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒; ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作） ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min; ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子） ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h;(菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另外不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态); ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。 |
