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产品简介
购买须知
| 产品名称 | Cas9都眼红的最新基因编辑技术MUCICAT |
| 商品货号 | TSPLA11130 |
| 商品信息 | CRISPR转座酶在不引入DNA双链断裂的情况下实现基因组特定位点的DNA整合，不受宿主同源重组效率的限制。杨晟实验室将其部署为基于CRISPR-转座系统的多拷贝染色体整合工具（Multiple chromosomal integration by CRISPR associated transposase, MUCICAT）,应用于重组蛋白质表达基因剂量优化，但还未展示其多重基因中断这一优势。杨晟实验室近日在The CRISPR Journal期刊发表文章“Programming Cells by Multicopy Chromosomal Integration Using CRISPR-Associated Transposases”报道了升级版的MUCICAT。以N-乙酰氨基葡萄糖的合成为例，需要完成2基因簇中断与1-11拷贝菌株文库构建工作。即使使用最新版的Cas9系统，预计也需要构建13个质粒，14轮转化，30天时间。使用MUCICAT仅需构建2个质粒，4轮转化，8天时间。MUCICAT多拷贝文库中一株5拷贝菌株为质粒版生产菌株产量的6倍以上，且更稳定。MUCICAT看来可以将细胞编程速度提升数倍，在代谢工程等领域会得到广泛的应用。 |
| 使用说明 | 质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必先转化提质粒后使用）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒; ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作） ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min; ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子） ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h;(菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另外不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态); ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。 |
