微信小陈
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产品简介
购买须知
| 产品名称 | GTR-CRISPR 技术一步法多靶点快速编辑酿酒酵母（一次8个基因） |
| 商品货号 | TSPLA11135 |
| 商品信息 | GTR-CRISPR是一种基因编辑技术，用tRNA序列将多个gRNA串联起来表达，极大提高了在酿酒酵母中的基因编辑数目和效率。利用此系统，在获得引物后７天内，能够构建出质粒并同时编辑８个基因，效率为87％，为目前世界上在酿酒酵母中编辑效率最高和数目最多的基因编辑体系。我们进一步开发了一种更快捷的GTR-CRISPR系统，通过将Gold-Gate反应液直接转化入酵母，跳过了大肠杆菌中的构建质粒步骤，极大地节约了时间。利用快速方法，我们能够在获得引物后３天内同时编辑６个基因，效率为60％，即使是未优化的gRNAs效率也能达到23％。我们利用该系统来简化酵母脂质代谢网络，仅在10天内就完成了对８个基因的删除，提髙了游离脂肪酸产量约30倍. |
| 使用说明 | 质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必先转化提质粒后使用）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒; ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作） ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min; ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子） ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h;(菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另外不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态); ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。 |
