产品名称 | Cat log # | 规格 | 储存条件 |
人T细胞活化扩增培养试剂盒 | CS-20004-50 | 1 kit | |
人T细胞基础培养基 | CS-20004-B | 50ml | 4oC |
人T细胞活化补充因子 | CS-20004-ATS | 0.35ml | 4oC |
人T细胞扩增补充因子 | CS-20004-EXS | 0.4ml | -20oC |
预筛选T细胞专用胎牛血清 | CS-TF-5 | 5ml | -20oC |
1.在4度冰箱解冻补充因子和胎牛血清,混匀后使用。
2.活化培养基配制:将1体积的活化补充因子和4体积的胎牛血清加入到35体积的基础培养基中,充分混匀,得到人T细胞活化培养基。如取100ul补充因子和400ul胎牛血清加入至3.5ml基础培养基,以此类推。
扩增培养基配制:将1体积的成熟补充因子和10体积的胎牛血清加入到89体积的基础培养基中,充分混匀,得到人T细胞扩增培养基。如取100ul补充因子和1ml胎牛血清加入至8.9ml基础培养基,以此类推。
1.使用磁珠分选人外周血单个核细胞中T细胞(参考所使用试剂盒的说明书),计数。
2.D0:使用活化培养基重悬T细胞,调整细胞密度至1*10^6/ml,按照如下表格所示将细胞铺于培养板:
培养板 | 完全培养基体积 | T细胞数/孔 |
96孔板 | 0.2ml | 0.2*10^6 |
24孔板 | 1.0ml | 1.0*10^6 |
3.将培养板置于细胞培养箱,37oC,5%CO2,静置培养。
4.D2:补充1/4初始培养体积的新鲜活化培养基(参考步骤2表格)。
5.D3:扩孔。
1)收集细胞,离心去除活化培养基,使用扩增培养基重悬,计数;
2)调整细胞密度至5*10^5/ml,按照如下表格将细胞铺于培养板,继续扩增培养T细胞:
培养板 | 完全培养基体积 | T细胞数/孔 |
96孔板 | 0.2ml | 1*10^5 |
24孔板 | 1.0ml | 5*10^5 |
6.D5/ D7:细胞计数,按照步骤5所示进行细胞扩增,或收集细胞进行后续操作和分析。