在检测和定量未知样本中抗原的浓度时，大多数研究人员依赖于酶联免疫吸附试验（ELISA）。这是完全可以理解的，因为这种基于平板的分析技术具有完全健壮的性质，显示出异常的灵敏度，并且快速容易执行。
如果是这样的话，为什么你的ELISA实验给出的结果不太理想？发生这种情况时你应该怎么办？以下是研究人员在进行ELISA实验时遇到的一些最常见的问题以及一些可能的解决方案。
弱或低信号强度
你是否反复得到低于吸光度下限的读数？目标分析物的浓度是否超出标准曲线的范围？如果你有这些问题，你可能有问题，你的试剂，你的抗体，或板读取在不正确的波长。如果你认为你的问题是由这些因素引起的，这里有一些技巧来纠正问题。
开始分析前，确保试剂处于室温。
试剂储存在2-8摄氏度，使用前检查有效期。
确保试剂准备正确并按正确顺序添加。
检查试剂是否存在干扰缓冲液或样品成分（如叠氮化钠、EDTA）。
始终遵循推荐的抗体稀释。
尝试增加你的抗体的孵育时间，以确保最大的抗体结合和放大信号。
将HRP浓度增加50%以增加信号。
使用推荐的波长或滤光片，并根据ELISA底物的类型准确设置读板器高背景
在ELISA平板上的阴性对照孔中获得大于0的值表示高背景信号，这可能破坏整个分析的结果。这不是你想要的，对吧？由于高背景错误可能是由抗体、缓冲液、底物和/或平板的问题引起的，因此您需要做以下几点以确保不会遇到此问题。
考虑降低你的抗体浓度或运行优化试验，以确定浓度，将提供最佳的结果。
运行阴性对照以确定交叉反应性是否导致问题。
通过使用亲和纯化抗体和合适的阻断缓冲液防止抗体的非特异性结合。根据方案建议对油井进行预处理也会有所帮助。
将底物贮存在黑暗处，并在黑暗中进行底物培养。
如果你的缓冲液无效或被污染，尝试使用新鲜的缓冲液或更高浓度的阻断蛋白。你也可以考虑增加阻塞时间。
高背景也可能是由于洗涤缓冲液中的盐浓度不够理想造成的。如果是这样的话，试着增加盐的浓度来减少非特异性的相互作用。
脏的或有缺陷的印版会导致高背景，所以根据方案建议清洗印版。
高井间变化
如果得到的结果高度不一致，则很有可能在平板处理/装载或制备或使用试剂时出错。考虑以下建议，以防止这些问题破坏您的结果。
孵育过程中不要堆放培养皿，以确保温度分布均匀，并确保培养皿在使用前加热均匀，以避免边缘效应。
在孵育前和平板读数前，确保孔中没有气泡。
彻底清洗所有井，因为不均匀的清洗可能会导致较大的变异系数（CV）和扭曲你的结果。
充分混合所有试剂，确保样品和试剂在统一条件下储存。
