宁波泰斯拓生物

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泰斯拓生物:ELISA实验结果显色淡灵敏度偏低

 

ELISA实验结果常见问题及解决方案——显色淡灵敏度偏低

当完成所有实验步骤进行底物TMB溶液显色,发现酶标板中孔的显色比较浅,只有微弱的信号呈现,可能的原因及解决方法:


序号

可能原因

解决方法

1

 试剂盒未充分平衡

  试剂盒从2~8℃冰箱取出后打开盒盖,于室温平衡至少20分钟,
  确保所有试剂已平衡至室温(约25℃)。

2

 样品不适合做ELISA检测

  样品一般选择培养上清、血清、血浆。其他样品形式可能不适
  合做ELISA检测或者需要优化检测的条件(例如稀释液的成分)。

3

 酶标板在贮存或洗后拍干时过分干燥

  防止板过于干燥。

4

 包被抗体遭到破坏

  操作温和,移液枪不能碰到孔底。

5

 样本和抗体孵育条件不合适

  按照说明书条件,建议孵育过程中全程振荡孵育。

6

 洗涤浸泡时间过长

  按照说明书操作,勿人为增加浸泡时间。

7

 偶联HRP试剂污染

  弃去试剂,重新配置。

8

 错误的稀释偶联HRP试剂

  弃去试剂,重新配置。

9

 TMB底物孵育时间过短,因非人为因素
 影响,需要优化孵育时间

  确定合适的孵育时间:人为判定-最高浓度S1出现深蓝色,S4-5
  有淡蓝色。或机器判定620 nm波长下测定OD值达到0.6-0.65。

10

 样本浓度过高或存在基质效应

  建议做不同稀释倍数,确认样本最佳稀释倍数。

11

 酶标仪滤光片设置有问题或者波长选
 择不对

  确认仪器设置及选择正确的波长检测。

12

 酶标板不适合做ELISA

  不能使用细胞培养板,建议使用ELISA专用高吸附力板子。

 

总结为避免显色淡灵敏度低,需注意以下几点:

1、常规ELISA试剂盒平衡至30min;

2、检测抗体、偶联HRP请按说明书稀释比;

3、样本、抗体孵育条件(温度、转速),请根据说明书;

4、控制TMB底物显色时间。