ELISA法进行抗原包被的时候，抗原包被的浓度是如何确定的。看到有些资料中方阵滴定法，稀释抗原和血清，以强阳性抗原液A值在0.8左右，阴性参考A值<0.1的条件为最适条件。为什么选择这个为最适条件？弱阳性血清有什么用处？
在摸索包被浓度的时候，血清中抗体的含量是固定的吗？需要提前定值吗？急需答案
一般我们做的时候抗原抗体两个变量，抗原的浓度是根据你的抗原的纯度来定的，一般纯化的蛋白是2ng，有时候是要抗体的滴度，抗原浓度固定，抗体或者血清就要拉稀释度，
这和酶标仪的灵敏性有关.
一般OD值在1.0左右酶标仪比较灵敏，测量的数据比较准确.OD值如果很深,达到2点几就不灵敏了.所以我们一般选OD值在1.0左右进行分析.
OD 1.0-1.5之间最佳，当然依据酶标仪的性能而定。
个人觉得棋盘ELISA一定要选择OD1.0的点是个误区。首先不同型号的灵敏度应该是不一样的；其次OD为1.0指的是某个抗原抗体浓度条件下的OD值，并不代表通过此次棋盘得到的最佳抗原抗体的浓度所做的各种后续ELISA实验的值也是1.0左右，所以说选择处于酶标仪灵敏度的最佳状况并不一定符合后续的实验。（不善表达，不知自己描述清楚没有）
我自己觉得要根据不同的实验类型（间接，双抗夹心或是竞争等）来选择最佳抗原抗体工作浓度。象竞争ELISA，做棋盘的目的是包被抗原和一抗的量，试想如果包被抗原太浓，意味着需要竞争抗原浓度也不能小（毕竟是竞争对手不能悬殊太大），这就注定了竞争ELISA的检测限不好（因为竞争抗原往往是要检测的东西，所需浓度越大IC50也就越大）。而一抗也不能足量，否则即能与包被抗原反应又能与检测抗原反应，就不能称为竞争ELISA了。也不能太少，否则整体OD读数太低。
双抗夹心ELISA也是同样的道理，找到包被抗体和酶标抗体的平衡点，即能OD与本底之间的平衡点。
