普通荧光显微镜的操作指南和注意事项?
1、操作指南:
(1)关闭房间内的电灯,开启显微镜汞灯。为延长汞灯的使用寿命,汞灯开启不到15-30分钟的请在15-30分钟后关闭汞灯。再次打开汞灯电源的间隔时间也应该在15-30分钟以上,避免反复开关。
(2)根据样品荧光素选择相应荧光组件。使用减光片对荧光强度适当调整(因为荧光强度不可调,所以只能使用各种减光片来调整观察效果)
(3)选择滤光片。常用的有绿、蓝、紫、紫外等,分别对应不同的激发光波长。
(4)放好染色切片,找到合适的视野。在荧光状态下观察标本,标本内的荧光会较快的衰减,所以要避免长时间的在荧光下观察,可以先在明场下调整好要观察的位置再使用荧光。
(5)需拍照先确认照相机已装好。
(6)使用结束关闭所有电源并做好使用记录。
(7)如需详细说明,请借阅说明书。
2、主要事项:
(1)严格按照荧光显微镜出厂说明书要求进行操作,不要随意改变程序。
(2)应在暗室中进行检查。进入暗室后,接上电源,点燃超高压汞灯5~15min,待光源发出强光稳定后,眼睛完全适应暗室,再开始观察标本。
(3)防止紫外线对眼睛的损害。在调整光源时应戴上防护眼镜。
(4)检查时间每次以1~2h为宜,超过90min,超高压汞灯发光强度逐渐下降,荧光减弱;标本受紫外线照射3~5min后,荧光也明显减弱或褪色;激发光长时间的照射,会发生荧光的衰减和淬灭现象;所以最多不得超过2~3h。
(5)荧光显微镜光源寿命有限,标本应集中检查,以节省时间,保护光源。天热时,应加电扇散热降温,新换灯泡应从开始就记录使用时间。灯熄灭后欲再启用时,须待灯光充分冷却后才能点燃。一天中应避免数次点燃光源。关闭汞灯至少在开启15-30分钟后。
(6)标本染色后立即观察,因时间久了荧光会逐渐减弱。若将标本放在聚乙烯塑料袋中4℃保存,可延缓荧光减弱时间,防止封裱剂蒸发。
(7)荧光亮度的判断标准:一般为四级,即“—”——无或可见微弱自发荧光。“+”——仅能见明确可见的荧光。“++”——可见有明亮的荧光。“+++”——可见耀眼的荧光。
(8)所使用的玻片等载体,都必须厚度均匀,无明显的自发荧光,如果使用油镜,还必须保证镜油为无荧光镜油。
(9)电源最好装稳压器,否则电压不稳不仅会降低汞灯的寿命,也会影响镜检的效果。