一抗孵育的条件和浓度如何摸索?
1、孵育条件选择:根据大量外文文献参考,4度过夜的最多,37度或直接室温的较少。故可以按照4度过夜+室温或37度复温(增进抗体抗原结合和防止脱片)。
2、组织切片的选择:仅选择某一组同一只动物标本,这样才有可比性,且最好是预想肯定阳性的组别中的动物切片。
3、一抗浓度摸索:主要参照说明书推荐的浓度,并结合文献中对于某种组织的大概浓度范围,同时也要考虑不同公司之间同一抗体的浓度和效价的不同。从最高浓度向低浓度方向多摸索几个梯度,等浓度摸索好后,在大量的做不同组别的切片。